人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
注意：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的，待細(xì)胞長(zhǎng)到70-80%匯合度時(shí)，去掉培養(yǎng)液，加含500ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間會(huì)有少部分細(xì)胞懸浮起來(lái)，屬于正常情況，通過(guò)換液可以去掉，等細(xì)胞長(zhǎng)滿就可以消化 傳代了，這時(shí)可以一直用含藥物培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，兩代之后就可以將藥物濃 度提髙到l〇〇〇ng/ml，細(xì)胞凍存時(shí)不要在培養(yǎng)基中加藥物。

1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO);北美胎牛血清 (United States, GIBCO)，

10%;雙抗 1%，添加 2mML-GUJ，添加 luM Adr。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
 
2)細(xì)胞處理：
1.復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。

2.細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 
3.細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細(xì)胞特性：
1)來(lái)源：ruxian癌
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣貼壁生長(zhǎng)
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1)干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細(xì)胞

，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供使用。