1、血清
A、DNA-陽離子脂質體復合物構成時不能含血清，由于血清會影響復合物的構成。
B、一般細胞對無血清培養(yǎng)能夠耐受幾個小時沒問題，轉染用的培養(yǎng)液能夠含血清也能夠不加，但血清一度曾被以為會降低轉染效率，轉染培養(yǎng)基中參加血清需求對條件進行優(yōu)化。
C、關于對血清缺乏比較敏感的細胞，能夠運用養(yǎng)分豐厚的無血清培養(yǎng)基，或許在轉染培養(yǎng)基中運用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議運用轉染試劑。有條件的話，能夠用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時分要輕，靠邊際緩緩參加液體，然后不要吹吸細胞，而是滾動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面。假如洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多。
2、抗生素(PS)
抗生素，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般關于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素能夠進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養(yǎng)基中不能運用抗生素，甚至在預備轉染前進行細胞鋪板時也要防止運用抗生素。這樣，在轉染前也不用潤洗細胞。關于穩(wěn)定轉染，不要在選擇性培養(yǎng)基中運用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康成長，運用比含血清培養(yǎng)基更少的抗生素量。
3、細胞狀況
這點非常重要，不要急于求成，必定要讓細胞處于jia的成長狀況再做。有文獻說傳代不要超越17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀況hao，不要用傳了許多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會發(fā)生改變。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包含了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在試驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控改變等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的改變。假如隨時刻發(fā)現(xiàn)這種改變，消融一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。
4、細胞鋪板密度
用于轉染的jia細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或使用而異。因轉染試劑對細胞有毒害效果，細胞太少，容易死。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml，確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。由于轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同試驗間堅持一個根本的傳代步驟很重要。
5.啟動子的選擇
取得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細胞類型中能夠取得高表達活性。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤病毒)相比，在BHK-21中其活性高。這三種病毒啟動子在T細胞來歷的細胞系，如Jurkat中組成表達水平較低。
6、DNA量
高質量的DNA關于進行的轉染至關重要。轉染的質粒必定純度好、濃度高、無內毒素。濃度不要低于0.35ug/ul。產(chǎn)物表達，48小時mRNA表達gao；72h蛋白表達gao。
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